三、主要有效成分含量的测定方法

    1.紫外分光光度法

    (1)如新鲜植物中含有多元酚氧化酶，则先在100℃加热1小时，或浸在1%亚硫酸氢钠溶液中，然后在石英砂中磨碎，用70%乙醇提取3次(总体积≈10倍样品)，提取液于40℃-50℃减压浓缩至原体积的1/10，再用纸层析分离。吸取此液0.01毫升点在whatman No.1滤纸上，用丁醇-甲醇-水(4∶1∶5)的水相蒸气饱和过夜(20℃)，次日，再用丁醇相下行展开8小时，取出，挥去溶剂后，绿原酸在紫外灯下显暗蓝色荧光，Rf值为0.73，如用氨气熏则变为绿黄色，如喷Hoffners试剂(1%亚硝酸钠的1%甲醇溶液)，斑点则变为黄色，如喷1N氢氧化钠溶液则变为红色。绿原酸的定量则不喷亚硝酸钠溶液及氢氧化钠溶液，可从纸上洗脱，用紫外分光光度计定量。

    (2)生药0.5克，用70%乙醇在50℃条件提取(5×10毫升)，取提取液0.2毫升点在滤纸上，于暗处用丁醇-醋酸-乙酸丁酯-水(9∶28∶47∶16)层析18小时，在紫外灯下检出绿原酸，用70%乙醇10毫升洗脱，在波长324nm处测吸收度。

    (3)纸层析法，用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)在19℃展开26小时而分开，斑点用等量10%醋酸溶液及1%亚硝酸钠溶液喷雾而显色，绿原酸(黄色)的Rf值为0.50。如用氢氧化钠溶液喷雾，绿原酸变为红色。绿原酸的定量是将相应的斑点用异丙醇或甲醇或水洗脱，在波长327nm测量吸收度。

    (4)取生药于60℃烘至恒重，称取1克，置于瓶中，加95%乙醇25毫升，在80℃水浴上提取1小时。倾出提取液，再加95%乙醇25毫升，重复提取。合并两次提取液，稀释至一定浓度，在波长324nm处测吸收度，用下面公式计算生药中绿原酸的含量。绿原酸含量%=E×稀释倍数K×样品量(毫克)×100×100% E为吸收度，K为测定常数。用绿原酸纯品测绘标准曲线，按E=KCL的公式(C为标准液浓度，单位为毫克/100毫升，L为比色杯厚度，1厘米)，求得常数K为0.479。用此法分析了从各地药材公司收集的金银花样品中绿原酸的含量。

    (5)生药粉1克，用70%甲醇提取24小时(室温、暗处)或水浴80℃提取1小时，取部分提取液加于含有2克聚酰胺粉的小柱，用水、稀甲醇溶液洗脱柱子，绿原酸可用0.02%氢氧化钠的70%甲醇溶液洗脱，再用70%甲醇稀释至一定体积，在波长324nm测吸收度，与标准品比较而定量。

    2.容量法

    (1)碘量法

    绿原酸易吸附在wofatit L150上，可从混合物中分离，然后用0.1N盐酸溶液或稀硫酸洗脱，用碘量法滴定，如用3N氢氧化钠溶液洗脱则绿原酸被部分地分解成咖啡酸及奎尼酸，但并不影响结果。

    (2)非水滴定 绿原酸在乙腈-甲酸(3∶1)混合液中可被醋酸铜氧化成相应的邻醌(o-quinone)，此反应可用于植物样品中酚类化全物的氧化滴定。