2.4  检测波长的选择

    以江苏碧螺春的茶叶样品液为例，考察该样品液在190~400 nm范围内不同波长下的色谱分离情况。结果表明，在210 nm处，茶叶样品中有吸收的组分最多，吸收强度也最大（如图1所示），空白运行的基线平稳，不干扰样品检测。

    图1  茶叶样品液（江苏碧螺春）在210 nm下的吸收色谱（略）

    Fig.1  Chromatograms of the tea sample（Jiangsu Biluochun）at 210 nm

    2.5  指纹谱的建立[5,6]

    各批次的茶叶样品按2.3项下制备样品溶液后，用2.2项下的色谱条件进样分析（进样量20 μL），可获得各批次样品在210 nm下的色谱图以及色谱图上各色谱峰的保留时间和峰面积值。在所选择的色谱条件下，样品中80％以上的色谱峰的分离度Rs值均大于1，表现出良好的色谱行为。

    2.5.1  数字化指纹谱的建立  以EGCG所对应的色谱峰为参照峰，α值的窗口设为1％，用各批次样品的相对保留时间值（即α值）和相对峰面积值的100倍（即100Ar）构建茶叶指纹谱，23个批次的茶叶样品共计出峰130个。

    2.5.2  特征指纹谱的建立  （1）两两重叠率的计算  依据茶叶的数字化指纹谱，计算两两样品之间的重叠率，而后统计各批次绿茶样品与其余13个批次样品间重叠率在70%、75%、80%以上的数目，结果如表1所示。表1说明，14个绿茶样品中，每个样品与其余13个样品间的重叠率都在70％以上，但若以75％或80％为限，则各样品间的两两重叠率能达标的个数就有明显的降低：其中福建绿茶最为明显，当以80％为限时，它与其它13个样品的重叠率无一达到；此时仅11、12、13号3个样品达标数在11个以上。（2）特征指纹谱的建立  从表1获知，每个绿茶样品与其它13个样品的两两重叠率均在70％以上，可以这14个样品的指纹谱作为特征指纹谱建立的基础。以85％的样品共有（即至少12个样品共有）作为特征指纹的入选条件，得到绿茶的HPLC特征指纹谱（A谱），如表2所示。

    表1  绿茶样品间两两重叠率在70％、75％、80％以上的数目（略）

    Table 1  The amount of overlapping ratios over 70%，75%，80% between green tea samplesNo.

    表2  绿茶的HPLC特征指纹谱（A谱，14个样品）（略）

    Table 2  Characteristic high performance liquid chromatography??fingerprint spectrum of green tea（A，fourteen samples）

    在这些特征指纹峰中，7个定量组分由于量上占据的重要地位，对应的色谱峰全部入选。各批次绿茶样品的出峰数在53~70个之间，绝大部分在60个上下，现有42个色谱峰被定为特征指纹，占到总色谱峰数的60.0％~79.2％；特征指纹峰的峰面积之和在样品峰面积总和中的百分比均超过70％，说明这组峰群可作为样品内在性质的代表，以之作为该类样品分类的依据，将使鉴定更具可靠性和可信性。

    2.6  指纹谱的方法学考察

    随机抽取，12、13、10、15、19、23号制备好的茶叶样品液，用Agilent 1100高效液相色谱仪进样分析。所得图谱按2.5.1项下建立指纹谱，比较EGC、DC、CAF、EC、GCG、ECG  6种成分在两台液相仪器上的α和100Ar。结果除安徽祁门红茶的|Δ100Ar|有较大偏差外，6个组分的|Δα|在0.000226~0.006528之间，|Δ100Ar|在0??039531~7.036086之间。

    取江苏碧螺春茶叶为样品，以各特征指纹峰的相对保留时间α和相对峰面积100Ar的RSD%值为评价指标，进行其它方法学考察。结果表明，所建立的绿茶指纹谱有着良好的精密度、稳定性和重现性。