甾体:甾体类化合物结构相似,采用常规方法很难对某一组分进行分离纯化和定量测定。而甾体分子含有羟基取代基,可以利用其和功能单体形成氢键或酯键,制备出相应的MIPs,使之得到高效分离。目前,应用MIT选择性分离、分析甾体分子已成为关注的热点,但多数涉及人体内的一些活性物质,如胆固醇、皮质醇等,用于植物中甾体成分的分离纯化较少。
油菜素甾酮被认为是一种可以刺激植物生长的活性物质,但常规提取过程非常繁琐。Kuglmiya等利用p-乙烯基苯硼酸和油菜素甾酮中的两组顺式羟基发生酯化作用,制备了共价MIPs。由于该法所得的MIPs对模板具有严谨、精确的吸附,能够防止同样具有顺式羟基的雌激素三醇等成分的干扰。
香豆素:Hu等用MIP-SPE从秦皮中提取得到了秦皮乙素,并通过选择洗涤和洗脱溶剂,设计了一个分离秦皮乙素和其结构类似物秦皮甲素、香豆素、7-氧基香豆素及瑞香素的方案。
挑战:技术难题仍需攻克
虽然MIT在中药分离中的应用研究已日益广泛,而且与其他色谱分离技术相比,它具有许多独特的优点,包括分子识别性强、固定相制备简便快速、操作简单且溶剂消耗量小、模板和MIPs都可以回收再利用等。但是,作为一种新型的分离手段,MIT本身还存在许多有待解决的问题,如分子印迹和识别过程的机制和定量描述、功能单体和交联剂的选择局限性等。
首先,MIT应用的有些模板往往十分昂贵或难于得到,且通常每合成1克干聚合物就需要50~100微摩尔/升的模板,模板需要量较大,回收率也有待进一步提高。
其次,MIT在特殊的分离领域的应用还需大力研究,由于结合位点的非均匀性和实际可利用官能团的数量有限,MIPs作为高效液相色谱(HPLC)固定相时常常出现色谱峰过宽和拖尾的情况,从而使柱效降低,影响了分离效果。因此,为获得较大批量的产物,达到较大规模的制备水平,需要进一步增加聚合物中的实际有效结合位点以增加分离柱容量。
三是目前制备相对分子质量较高的成分的MIPs有一定困难,所以现在使用的模板均为小分子的苷元,需要进一步开发中药活性成分的模板。MIPs的聚合方法多样,包括溶液聚合(本体聚合)法、悬浮聚合法、原位聚合法、种子聚合法、表面印迹法等,而在上述文献中,多用溶液聚合法。这种方法需研磨过筛,费时费力,材料损失也较多。
尽管MIT具有上述种种局限性,还有待进一步深入研究,但由于其具备很高的选择性以及优良的理化特性,必然会随着技术本身的不断发展和应用的逐渐增多,而在中药活性成分分离纯化领域发挥越来越大的作用。